ความแตกต่างที่สำคัญ: พระคัมภีร์คาทอลิกมีหนังสือสี่สิบหกฉบับดั้งเดิมของพันธสัญญาเดิม (ซึ่งรวมถึงเจ็ดเล่มของ Apocrypha) และหนังสือยี่สิบเจ็ดในพันธสัญญาใหม่ พระคัมภีร์โปรเตสแตนต์มีเพียงหนังสือสามสิบเก้าเล่มในพันธสัญญาเดิมและหนังสือยี่สิบเจ็ดเล่มในพันธสัญญาใหม่

ความแตกต่างที่สำคัญระหว่างคริสตจักรคาทอลิกและโปรเตสแตนต์คือความเชื่อในพระคัมภีร์ ชาวคาทอลิกมองว่าพระคัมภีร์มีอำนาจเท่าเทียมกับศาสนจักรและประเพณีในขณะที่โปรเตสแตนต์มองว่าพระคัมภีร์เป็นผู้มีอำนาจสูงสุดสำหรับความเชื่อและการปฏิบัติ
หนึ่งควรทราบว่าพระคัมภีร์ไม่ได้เป็นเพียงหนังสือเล่มหนึ่ง; มันคือชุดของหนังสือจากงานเขียนถึงเหตุการณ์ทางประวัติศาสตร์ มันเป็นห้องสมุดของเรื่องราวชีวิตของพระเยซูอัครสาวกและชีวิตของพวกเขาหลังจากที่พระเยซูสิ้นพระชนม์บนไม้กางเขน ในช่วงปลายศตวรรษที่ 4 หนังสือและเรื่องราวต่าง ๆ เหล่านี้ได้รับการปรับให้เป็นเล่มเดียวซึ่งเป็นพระคัมภีร์ที่ทันสมัยอย่างที่เรารู้ พระคัมภีร์ใหม่ประกอบด้วยสองส่วนคือพันธสัญญาเดิมและพันธสัญญาใหม่
ทั้งพระคัมภีร์คาทอลิกและโปรเตสแตนต์รวมถึงพันธสัญญาใหม่ในรูปแบบเดียวกัน ความแตกต่างเกิดขึ้นในพันธสัญญาเดิม พันธสัญญาเดิมที่รวมอยู่ในพระคัมภีร์โปรเตสแตนต์เปลี่ยนไปเป็นนักบุญของหลักคำสอนหรือหนังสือ Canonization เป็นกระบวนการในการเลือกหนังสือที่ควรอยู่และเป็นส่วนหนึ่งของพระคัมภีร์และควรแยกออก โปรเตสแตนต์ไบเบิลรวมเฉพาะหนังสือที่ถือว่าเป็นคำพูดของพระเจ้า ไม่รวมหนังสือและเรื่องราวที่ถูกเขียนโดย 'man' กระบวนการทำให้เป็นนักบุญนี้ใช้เวลาหลายศตวรรษ
พันธสัญญาเดิมในคัมภีร์ไบเบิลต้นฉบับมีพื้นฐานมาจากการแปลภาษากรีกของชาวยิวในพระคัมภีร์ที่เรียกว่าพระคัมภีร์ไบเบิลฉบับ ประมาณ 100 AD พระแรบไบของชาวยิวได้แก้ไขพระคัมภีร์ของพวกเขาและสร้างบัญญัติของศาสนายูดายอย่างเป็นทางการซึ่งไม่รวมบางส่วนของพระคัมภีร์ไบเบิลฉบับกรีก
หนังสือที่ถูกลบคือ Tobit, Judith, 1 Maccabees, 2 Maccabees, ภูมิปัญญา (ของ Solomon), Sirach และ Baruch บางส่วนของหนังสือที่มีอยู่ก็ถูกลบออกเช่นสดุดี 151 (จากสดุดี), บางส่วนของพระคัมภีร์เอสเธอร์, ซูซานนา (จากดาเนียลในบทที่ 13), และเบลและมังกร (จากดาเนียลเป็นบทที่ 14)

อย่างไรก็ตามคริสตจักรโรมันคาทอลิกไม่ได้ทำตามขั้นตอนของโปรเตสแตนต์และยังคงยึดถือพันธสัญญาเดิมของพวกเขาในพระคัมภีร์ไบเบิลฉบับเก่า ดังนั้นโดยทั่วไปพระคัมภีร์คาทอลิกยังคงมีหนังสือสี่สิบหกฉบับดั้งเดิมของพันธสัญญาเดิม (ซึ่งรวมถึงเจ็ดเล่มของ Apocrypha) และหนังสือยี่สิบเจ็ดของพันธสัญญาใหม่ ในขณะที่คัมภีร์ไบเบิลของโปรเตสแตนต์นั้นรวมถึงหนังสือสามสิบเก้าเล่มในพันธสัญญาเดิมและหนังสือยี่สิบเจ็ดเล่มในพันธสัญญาใหม่